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丙酸是一種短鏈脂肪酸,化學(xué)式為CH3CH2COOH,分子量74.08,在水溶性中呈弱酸性,但有腐蝕性。能溶于水,乙醇,氯仿和乙醚等。一般通過化學(xué)合成和微生物發(fā)酵法得到。暫且不說化學(xué)合成,就微生物發(fā)酵來說,是通過甘油,葡萄糖,乳酸或乳糖等,在丙酸桿菌的作用下代謝產(chǎn)生。丙酸是一種重要的化工原料,它廣泛的應(yīng)用在食品,飼料,香料,醫(yī)藥,農(nóng)藥,印刷等領(lǐng)域,比如,防腐劑,飼料添加劑,香料中間體,醫(yī)藥中間體,化妝品添加劑等。
因為它是短鏈脂肪酸,檢測的主要方法是氣相色譜(GC)。當(dāng)然,也有其他的方法,比如高效液相色譜(HPLC),分光光度法等。
1.樣品處理
拿一個1.5ml的離心管,要棕色的。用精密的電子天平,稱取0.1g的樣品,準(zhǔn)確的放入到棕色離心管中。此時,加入1ml的20%磷酸水。離心管要蓋上蓋子,放到振蕩器上振蕩混勻1min。混勻后,要放到4℃冰浴中,超聲30min。放在冰浴中,可能是為了防止超聲過程中丙酸揮發(fā)出去,樣品中的含量就會減少,導(dǎo)致后面的檢測不準(zhǔn)確吧。接著,把離心管放在13000r/min離心機中離心30min。拿出來后,用移液器吸取上清液,用0.45um的膜過濾,就準(zhǔn)備檢測了。
2.色譜測試條件
這個條件很重要,是能不能測出來的關(guān)鍵步驟。每個參數(shù)值的設(shè)置范圍,直接決定了測試結(jié)果。這個不僅要靠經(jīng)驗,更需要結(jié)合實際情況去探索和開發(fā)。不僅需要時間,考驗試錯,容錯的能力。當(dāng)然,如果自己開發(fā)出來,而且測試結(jié)果很理想,那這套方法就是很珍貴了。不僅要對目標(biāo)化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)足夠掌握,還能了解氣相色譜的各個部件和參數(shù)的作用,組合優(yōu)化。
比如,采用N2為載氣,用DB-FFAP的色譜柱。進樣口溫度270℃,檢測器溫度280℃,氫氣的流速為50ml/min,氮氣的流速為30ml/min,空氣流速為500ml/min,分流比是50:1;程序升溫,初始溫度80℃保持4min,然后10℃/min升高到180℃,保持1min。進樣流速2ml/min,進樣量1uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
將標(biāo)準(zhǔn)品溶解,采用6個點的梯度稀釋,進樣到色譜儀中。對峰面積進行積分,對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度,用表格函數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。有時候,需要做方法學(xué)驗證,確保數(shù)據(jù)的可靠性。
4.樣品測定
樣品的測定,是和標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件,將測出來的色譜峰面積也進行積分。然后,代入到回歸方程中,計算出樣品中的丙酸含量。
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