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亮氨酸是一種支鏈氨基酸,來源于糙米,豆類,肉類,堅果,大豆粉和全麥等,人體不能合成,只能通過食物才能獲得。它常用于蛋白質(zhì)合成和能量代謝,可以提高生長激素的產(chǎn)量,促進(jìn)植物的生長。
測定樣品中亮氨酸含量,常用的方法是高效液相色譜法。它用于分離和測定化學(xué)物質(zhì)的含量,基本上包括準(zhǔn)備樣品、色譜柱選擇、流動相配制、樣品進(jìn)樣、柱溫控制、梯度洗脫、檢測器選擇、數(shù)據(jù)分析等。
對于色譜檢測條件來說,是相對比較重要的。有標(biāo)準(zhǔn)的方法,也有需要驗證的。參考的條件有:C18的反相色譜柱,醋酸-磷酸鹽:乙腈的流動相,流速1.0ml/min,檢測波長214nm,進(jìn)樣量5ul,柱溫25-30℃等。每種氨基酸的方法可能會有不同,具體會有適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
將樣品中的雜質(zhì)去除,使用乙腈等溶劑提取亮氨酸。如果用甲醇-水作為流動相,可以添加適量的有機(jī)酸或緩沖溶液調(diào)節(jié)。常用的檢測器是紫外-可見光譜檢測器。亮氨酸在214nm波長處有最大吸收峰,外標(biāo)法檢測。利用色譜軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析,計算亮氨酸的峰面積,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出亮氨酸的含量。
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