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植物組織中含有還原糖是一個(gè)大類(lèi),因?yàn)樵谔穷?lèi)中,分子結(jié)構(gòu)中含有游離醛基或酮基的單糖,以及含有游離醛基的二糖都具有還原性。從大體上來(lái)說(shuō),還原糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麥芽糖等。因?yàn)檫€原糖的特征比較明顯,就是含有醛基或酮基。我們需要采用試劑反應(yīng)的方法,和專(zhuān)門(mén)和這些醛基和酮基發(fā)生作用,生成顯色的產(chǎn)物,就可以通過(guò)對(duì)產(chǎn)物特征的檢測(cè),計(jì)算出還原糖的含量。通常的檢測(cè)方法有3,5-二硝基水楊酸法和斐林試劑滴定法。
菲林試劑法,就是利用還原糖和菲林試劑發(fā)生作用,生成磚紅色的沉淀。菲林試劑用的是0.1g/mL的NaOH溶液和0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成的,注意要現(xiàn)配現(xiàn)用。還原糖在堿性溶液中,加熱的情況下,能夠把菲林試劑中的Cu2+還原為Cu+,也就是氧化亞銅,使得藍(lán)色的菲林試劑沒(méi)有了本身的顏色。
配制好的菲林試劑呈現(xiàn)藍(lán)色的氫氧化銅沉淀,這種沉淀和酒石酸鉀鈉反應(yīng),生成可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱的條件下,以次甲基藍(lán)為指示劑,使用植物組織提取液滴定。提取液中的還原糖會(huì)和酒石酸鉀鈉銅發(fā)生反應(yīng),生成磚紅色的氧化亞銅沉淀,等滴定到終點(diǎn)的時(shí)候,稍微過(guò)量的還原糖就能夠?qū)⒋渭谆{(lán)轉(zhuǎn)還原,由藍(lán)色馬上變?yōu)闊o(wú)色,就是滴定的終點(diǎn)了。記錄一下滴定過(guò)程中消耗的提取液,計(jì)算出樣品中含有還原糖的量。由于還原糖具有醛基和酮基,在堿性溶液中煮沸,能把斐林試劑中的Cu2+還原成Cu+,使藍(lán)色的斐林試劑脫色,脫色的程度與溶液中含糖量成正比,在590 nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),也可以計(jì)算出所測(cè)樣品中還原糖的含量。
3,5-二硝基水楊酸溶液和樣品中的還原糖,在加熱的條件下,能夠還原成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸化合物。在一定的范圍內(nèi),還原糖的含量和顏色的變化是成一定線(xiàn)性關(guān)系的,在分光光度計(jì)的540nm波長(zhǎng)處可以測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),計(jì)算出樣品中的還原糖含量。
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