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柴胡皂苷a來源于北柴胡的干燥根,化學(xué)式為C42H68O13,分子量為780.982,它易溶于水、稀醇,不溶于苯、乙醚、氯仿等。研究表明,柴胡皂苷a具有多種生物活性,比如抗炎、抗病毒、抗癌、降血脂、保護(hù)肝臟等。它屬于β-香樹脂烷型五環(huán)三萜類化合物,苷元是齊墩果烷型,包括多個(gè)糖基和1個(gè)母核,也是一種天然的皂苷類化合物。藥理作用包括,通過抑制NF-κB通路減少炎癥因子(如TNF-α、IL-6)釋放,抑制TGF-β1的表達(dá),保守神經(jīng)等。
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)柴胡皂苷a的含量,主要采用高效液相色譜(HPLC),參考中國藥典的方法。
1.樣品處理
將樣本進(jìn)行粉碎處理,過4號(hào)篩,精密稱取0.5g,放在具塞錐形瓶中。加入5%的濃氨的甲醇溶液25ml,塞好塞子。在30℃的水浴中超聲(功率200W,頻率40kHz)處理30min,過濾。用甲醇20ml分2次洗滌容器和藥渣,將濾液合并,蒸干溶劑。殘?jiān)眉状歼M(jìn)行溶解,轉(zhuǎn)移到5ml容量瓶中,用甲醇定容到刻度,搖勻,過濾,待測(cè)。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫30℃。以乙腈為流動(dòng)相A,超純水為流動(dòng)相B,梯度洗脫,流速1ml/min。紫外檢測(cè)器,波長210nm,進(jìn)樣量10-20uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
精密稱量柴胡皂苷a的標(biāo)準(zhǔn)品,制成0.4mg/mL的溶液。并進(jìn)行梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),確保低點(diǎn)的濃度在檢測(cè)限的有效范圍內(nèi),并記錄各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值。依次進(jìn)樣到HPLC,測(cè)出各個(gè)色譜峰,記錄色譜峰的保留時(shí)間,對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分,對(duì)應(yīng)到標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2>0.999。
4.含量計(jì)算
將制備好的樣品溶液,進(jìn)樣到HPLC,和標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)相同的色譜條件。通過保留時(shí)間,可以識(shí)別出目標(biāo)色譜峰。對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,可以計(jì)算出樣品中的柴胡皂苷a的含量。
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