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甜菜色素是從植物甜菜中提取出來的一種天然色素,由甜菜紅素和甜菜黃素組成,甜菜紅素的主要成分是甜菜紅苷。易溶于水,難溶于醋酸、丙二醇,不溶于乙醇、甘油、油脂。甜菜紅苷的較大吸收波長(zhǎng)為538nm。甜菜色素易溶于水,在pH4.0-7.0范圍內(nèi)呈紅紫色;pH小于4.0或大于7.0時(shí),溶液顏色由紅變紫;pH超過10.0時(shí),溶液會(huì)變黃,甜菜紅素會(huì)轉(zhuǎn)變成甜菜黃素。可廣泛的用在食品,飲料,醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域。
檢測(cè)樣品中的甜菜色素含量,實(shí)驗(yàn)室常用高效液相色譜(HPLC)法,液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法,分光光度法等。以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程,僅供參考,如需檢測(cè)可以咨詢專業(yè)的檢測(cè)結(jié)構(gòu)或權(quán)威文獻(xiàn)資料。
1.樣品處理
用乙醇浸提法進(jìn)行甜菜紅素的提取。先將新鮮的甜菜根清洗干凈,切成一個(gè)一個(gè)的小塊,粉碎,加入乙醇溶液浸泡,再進(jìn)行攪拌,過濾。讓甜菜色素充分的溶解到乙醇中,然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將溶液中的乙醇都蒸發(fā)干凈,就得到了甜菜色素粗提物了。通過層析過濾的方法,將色素和其他雜質(zhì)分離出來,待測(cè)。提取過程中,要注意溫度,pH值,提取時(shí)間等細(xì)節(jié)。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mmx4.6mm,5um;柱溫:室溫。流動(dòng)相:A甲醇:B2%冰醋酸緩沖液(20:80),流速1ml/min。二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)538nm,進(jìn)樣量10-20uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
用甜菜紅色素的標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶液溶解,梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),在HPLC測(cè)出對(duì)應(yīng)的色譜峰。對(duì)各個(gè)峰面積進(jìn)行積分,對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,確保在有效的檢測(cè)限范圍內(nèi)。確定檢出限,回收率,方法重復(fù)性,精密度等。
4.樣品測(cè)定和計(jì)算
記錄了標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間,進(jìn)樣到HPLC測(cè)定,識(shí)別出樣品的色譜峰,并對(duì)它進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分。代入到回歸方程,可以計(jì)算出樣品中的甜菜紅素的含量。
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