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所謂游離棉酚,就是棉仁組織中呈現(xiàn)游離狀態(tài)的棉酚。棉酚是一種多酚類化合物,存在于錦葵科植物的根、莖和種子等。要說的是,它是有毒的。因?yàn)槊藁ㄗ约阂惨啦∠x害啊,那些不能自己防病蟲害的棉花,逐漸就被害蟲吃完了,剩下來的都是優(yōu)良的品種,自身體內(nèi)有能夠抵抗病蟲害的物質(zhì),也就是游離棉酚。棉酚是從棉籽中分離出來的色素物質(zhì),是倍半萜多酚物質(zhì),具有半縮醛、羥基醛和烯醇三種異構(gòu)體。棉仁中的棉酚有兩種,一種是結(jié)合態(tài)的棉酚,一種是游離態(tài)棉酚。游離棉酚對人和畜生都有毒,要小心的。
檢測棉花中的游離棉酚含量,方法還是挺多的。比如常見的分光光度法,更高準(zhǔn)確度的高效液相色譜(HPLC)法。如需更高靈敏度、更高分辨率的檢測,可以通過薄層色譜法、高效毛細(xì)管電泳法、液質(zhì)聯(lián)用法等。
1.分光光度法
國標(biāo)法的檢測原理:將70%的丙酮作為提取溶劑,游離棉酚在378nm處有最大吸收,測定不同濃度棉酚標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,同時測定樣品的吸光值并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較而定量。雖然這種方法操作簡便,但是準(zhǔn)確性較差?;桨贩z測的原理:采用異丙醇與正己烷的混合溶劑對游離棉酚進(jìn)行提取,并與苯胺反應(yīng)將棉酚轉(zhuǎn)化為苯胺棉酚,于最大吸收波長440nm處測定吸光值。
2.高效液相色譜(HPLC)法
HPLC是一種比較靈敏而且準(zhǔn)確的檢測方法,方法雖然是這個方法,實(shí)際操作起來卻是不同的。不同種類的樣品,檢測方法也是有所不同的。比如植物食品、動物體內(nèi)、棉花、血清等,如果只采用一種方法去測各種樣品,可能會出現(xiàn)結(jié)果的偏差。因此,在進(jìn)行檢測之前,需要對樣品進(jìn)行充分的了解,選擇最佳的方法。比如棉花中,將棉酚的醛基與手性氨基化合物進(jìn)行縮合,其產(chǎn)物的理化性質(zhì),尤其是色譜行為差異較大,再用高效液相色譜儀進(jìn)行分離和檢測。使用L-苯基丙氨醇與游離棉酚發(fā)生衍生化反應(yīng),分別生成(-)-棉酚-L-苯基丙氨醇和(+)-棉酚-L-苯基丙氨醇,以甲醇:水:磷酸=85:15:0.1為流動相,在C18柱上兩者有不同的保留時間,從而達(dá)到分離,檢測波長為254nm。
3.液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法
對于生物制品,比如血液樣品中的游離棉酚檢測,這個是代謝產(chǎn)物,含量相對比較小,需要采用更高靈敏度的LC-MS檢測。血漿樣品中游離棉酚用乙醚進(jìn)行提取,流動相為乙腈:30mmol/L醋酸銨=85:15,負(fù)離子模式,選擇性離子監(jiān)測,棉酚的檢測離子為517.2,內(nèi)標(biāo)物甘草次酸的檢測離子為469.3,氮?dú)饬魉?L/min,霧化室壓力40psig,氮?dú)鉁囟?50℃,毛細(xì)管電壓4000V,結(jié)果棉酚的保留時間3.6min,甘草次酸的保留時間3.1min,準(zhǔn)確度和精密度符合要求,可用來測定生物樣品中游離棉酚含量。
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