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黃芪甲苷是一種有機物,從中藥材黃芪中提取出來的。黃芪里面的活性物質(zhì)有多種,比如黃芪多糖、黃芪皂苷、黃芪異黃酮等。但是,黃芪甲苷含量是最能評價處黃芪質(zhì)量的。根據(jù)藥理研究,黃芪具有增強免疫力,強心降壓,抗疲勞等作用??梢愿纳菩姆喂δ?,對腎上腺增生有一定抑制。根據(jù)不完全統(tǒng)計,黃芪的產(chǎn)地有很多,以甘肅隴西的為優(yōu)。
檢測黃芪中的黃芪甲苷含量,一般用到高效液相色譜(HPLC)法。
HPLC檢測黃芪甲苷,重點就在色譜的條件。能不能檢測出來,檢測的準確度多少,就是看你怎么調(diào)試設(shè)備參數(shù),檢測出最清晰、最完整的色譜峰面積。當然,前期的樣品和標準品的準備,也是很重要的。如果前期的準備沒做好,很可能會沒提取出來,或與實際的含量有偏差。
色譜條件可以按照相關(guān)的檢測標準,也可以通過適應性試驗,最優(yōu)化設(shè)計,確定出最佳的檢測條件。比如采用C18的色譜柱,乙腈-水為流動相,蒸發(fā)光散射檢測器等,還有進樣量、進樣速率、柱溫等。
標準品是必要的,它是測定黃芪甲苷含量的基礎(chǔ)。取黃芪甲苷標準品,精密稱量,加入甲醇后制成0.5mg/ml的溶液。對于樣品來說,是要好好處理了。樣品要在索氏提取器中進行提取,先加入甲醇溶液,冷浸過夜,再加甲醇加熱回流4個小時,提取液回收,溶劑濃縮,殘渣加水10ml,微熱使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨試液充分洗滌2次,每次40ml,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘渣加水5ml使溶解,放冷,通過D101型大孔吸附樹脂柱,以水50ml洗脫,棄去水液,再用40%乙醇30ml洗脫,棄去洗脫液,繼用70%乙醇80ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。這個過程看起來是繁瑣的,這都是總結(jié)出來、驗證出來的操作方法,在實際過程中需要熟悉完整的流程,并對關(guān)鍵細節(jié)有足夠的掌握,咨詢做過的人,可以獲得相對有效的建議。
分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl,供試品溶液各20μl,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得。
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