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廣義的葉黃素是指類胡蘿卜素、葉黃素等,植物葉黃素是一種存在于蔬菜、花卉、水果等植物中的天然有機物質(zhì),目前已知的自然界中的類胡蘿卜素有600多種。葉黃素存在于蔬菜中,一般顏色越深的蔬菜,其中所含有的葉黃素也越高,也并不是絕對的。比如在菠菜、蘆筍、萵苣、芥藍等蔬菜中,都含有豐富的葉黃素。
葉黃素是一種含氧的類胡蘿卜素,在萬壽菊、香蕉、獼猴桃、玉米等植物中也廣泛存在。它是天然的抗氧化劑,能夠吸收藍光等有害光線,保護眼睛不受有害光損害。同時,還抵御人體內(nèi)的自由基,防止細胞或器官收到損傷,預防機體衰老等。
檢測植物體內(nèi)的葉黃素含量,一般采用的方法有高效液相色譜(HPLC)法、分光光度法等。
1.高效液相色譜(HPLC)法
HPLC檢測葉黃素含量是目前比較普遍的方法,它是通過將葉黃素的樣品溶解提取,注入HPLC的色譜柱,在流動相的作用下分離,利用紫外檢測器進行讀取數(shù)據(jù),記錄峰高和峰面積,通過標準曲線的方法來計算樣品中所含有的葉黃素含量。需要準備的是與之匹配的C18色譜柱和紫外檢測器,葉黃素標準品,甲醇和乙腈的流動相。檢測波長、流速、進樣量等參數(shù),可以根據(jù)已有的標準,或進行驗證以確定最佳的條件,獲得相對理想的檢測圖譜和數(shù)據(jù)。
制作標準曲線是檢測的必要條件,精密稱量葉黃素標準品,制備成標準溶液。設置梯度進樣濃度,在最佳的色譜條件下,上機檢測獲得對應的色譜峰。以葉黃素峰面積和進樣濃度呈一定的線性關系,制作呈標準曲線,并計算出回歸方程。下面,就要對樣品進行處理,和標準品檢測同樣的條件下進行檢測,測定的結(jié)果結(jié)合標準曲線,可以計算出樣品中的葉黃素含量。
2. 分光光度法:
該方法利用葉黃素在堿性條件下與醛類試劑反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物,對特定波長的光進行吸收,通過測量吸光度來定量測量葉黃素的含量??梢允褂米贤?可見分光光度計進行測量,結(jié)合標準曲線,計算出樣品中葉黃素含量。
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